WikiDer > Такс-промоутер

Tac-Promoter
Вектор tac для экспрессии бактерий высокого уровня

В Так-промоутер (сокращенно Ptac), или же такс вектор синтетически произведенная ДНК промоутер, полученный из комбинации промоторов из trp и лак опероны.[1] Обычно используется для производство белка в кишечная палочка[2].

Были сконструированы два гибридных промотора, функционирующих в Escherichia coli. Эти гибридные промоторы, tacI и tacII, происходили из последовательностей промоторов trp и lac UV5. В первом гибридном промоторе (tacI) ДНК выше положения -20 относительно сайта начала транскрипции была получена из промотора trp. ДНК ниже положения -20 была получена из промотора lac UV5. Во втором гибридном промоторе (tacII) ДНК выше положения -11 на сайте Hpa I внутри бокса Прибноу была получена из промотора trp. ДНК, расположенная ниже положения -11, представляет собой синтетический фрагмент ДНК из 46 пар оснований, который определяет часть гибридного бокса Pribnow и весь оператор lac. Он также определяет последовательность Шайна-Далгарно, фланкированную двумя уникальными сайтами рестрикции (переносимая последовательность Шайна-Далгарно).

Промоторы tacI и tacII соответственно направляют транскрипцию примерно в 11 и 7 раз более эффективно, чем дерепрессированный родительский промотор lac UV5, и примерно в 3 и 2 раза более эффективно, чем промотор trp в отсутствие репрессора trp. Оба гибридных промотора могут быть репрессированы lac-репрессором, и оба могут быть репрессированы изопропил-бета-D-тиогалактозидом. Следовательно, эти гибридные промоторы полезны для контролируемой экспрессии чужеродных генов на высоких уровнях в E. coli. В отличие от промоторов trp и lac UV5, промотор tacI имеет не только консенсусную последовательность -35, но также консенсусную последовательность бокса Pribnow. Это может объяснить более высокую эффективность этого гибридного промотора по отношению к любому из родительских промоторов.[1]

О

Промотор tac используется для контроля и увеличения выражение уровней целевого гена и используется в чрезмерное выражение из рекомбинантные белки. В tac Промотор назван в честь двух промоторов, составляющих его последовательность: 'тrp 'и' lacпромоутеры.

Бактериальный промоутеры состоят из двух частей: области "-35" и области "-10" ( Прибновый ящик). Эти две области связывают фактор сигма из РНК-полимераза, который затем инициирует транскрипция нижестоящего гена. Промотор tac состоит из области '-35' промоутер trp и область "-10" лак промотор (и отличается от родственного промотора trc на 1 п.н.[3]). Таким образом, промотор tac индуцируемый к IPTG (Изопропил β-D-1-тиогалактопиранозид), одновременно обеспечивая более высокую максимальную экспрессию генов, чем промоторы lac или trp. Это делает его подходящим для высокоэффективного производство белка рекомбинантного белка.[1] Сильное подавление экспрессии в "выключенном" состоянии важно, поскольку чужеродные белки могут быть токсичными для клетки-хозяина.

260(6):3539-41.

Приложения

Промоутер tac находит различные применения. Промоутер / оператор tac (дублированный PTAC) - одна из наиболее широко используемых систем экспрессии. Ptac представляет собой сильный гибридный промотор, состоящий из области -35 промотора trp и области -10 промотора / оператора lacUV5. Экспрессия PTAC подавляется белком lacI. ЛАСИq Аллель представляет собой промоторную мутацию, которая увеличивает внутриклеточную концентрацию репрессора LacI, что приводит к сильной репрессии PTAC. Добавление индуктора IPTG инактивирует репрессор LacI. Таким образом, уровень экспрессии PTAC пропорционален концентрации добавленного IPTG: низкие концентрации IPTG приводят к относительно низкой экспрессии PTAC, а высокие концентрации IPTG приводят к высокой экспрессии PTAC. Варьируя концентрацию IPTG, количество продукта гена, клонированного ниже PTAC, можно варьировать на несколько порядков.[4] Например, система PTAC используется для экспрессии слитого белка в рамках экспрессии PMAL-C2X.[5]

Рекомендации

  1. ^ а б c de Boer, H.A .; Комсток, Л. Дж .; Вассер, М. (1983-01-01). «Промотор tac: функциональный гибрид, полученный из промоторов trp и lac». Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки. 80 (1): 21–25. Дои:10.1073 / pnas.80.1.21. ISSN 0027-8424. ЧВК 393301. PMID 6337371.
  2. ^ Аманн, Эгон; Охс, Биргит; Абель, Карл-Йозеф (30 сентября 1988). «Точно регулируемые векторы промотора tac, пригодные для экспрессии неслитых и слитых белков в Escherichia coli». Ген. 69 (2): 301–315. Дои:10.1016/0378-1119(88)90440-4. PMID 3069586.
  3. ^ Brosius, J. (1985-03-25). «Расстояние между -10 и -35 областей в промоторе tac. Влияние на его активность in vivo». Журнал биологической химии. 260 (6): 3539–41. PMID 2579077.
  4. ^ Стэнли Малой, профессор, декан, Колледж наук, заместитель директора Центра микробных наук, доктор философии. Калифорнийский университет в Ирвине. [1][нужен лучший источник]
  5. ^ Биолаборатории, Новая Англия. "Экспрессия белка, связывающего мальтозу | NEB". www.neb.com. Получено 2016-02-26.[нужен лучший источник]

Смотрите также