WikiDer > Антитерминация - Википедия

Антитерминация это прокариотический помощь клетки, чтобы исправить преждевременные прекращение из Синтез РНК вовремя транскрипция из РНК. Это происходит, когда РНК-полимераза игнорирует сигнал завершения и продолжает растягивать свой транскрипт до тех пор, пока не будет достигнут второй сигнал. Антитерминация обеспечивает механизм, с помощью которого один или несколько генов на конце оперона могут быть включены или выключены, в зависимости от того, распознает ли полимераза или не распознает сигнал терминации.

Антитерминация используется некоторыми фаги для регулирования перехода от одной стадии экспрессии гена к другой. Ген лямбда N кодирует белок антитерминации (pN), который необходим, чтобы позволить РНК-полимеразе читать терминаторы, расположенные на концах непосредственно ранних генов. Другой белок антитерминации, pQ, требуется позже при фаговой инфекции. pN и pQ действуют на РНК-полимеразу, проходя через определенные сайты. Эти сайты расположены в разных относительных положениях в соответствующих единицах транскрипции.

Антитерминация может быть регулируемым событием

Антитерминация была обнаружена в бактериофаг инфекции. Общей особенностью контроля фаговой инфекции является то, что очень немногие фаговые гены могут транскрибироваться бактериальным хозяином. РНК-полимераза. Однако среди этих генов есть регуляторы, продукты которых позволяют экспрессировать следующий набор фаговых генов. Одним из таких регуляторов является белок антитерминации. В отсутствие белка антитерминации РНК-полимераза оканчивается на терминаторе. Когда присутствует белок антитерминации, он проходит мимо терминатора.^[1]

Лучше всего охарактеризованный пример антитерминации представлен лямбда-фаг, в котором было обнаружено явление. Он используется на двух стадиях экспрессии фага. Белок антитерминации, продуцируемый на каждой стадии, специфичен для конкретных единиц транскрипции, которые экспрессируются на этой стадии.

РНК-полимераза хозяина первоначально транскрибирует два гена, которые называются непосредственными ранними генами (N и cro). Переход к следующей стадии экспрессии контролируется предотвращением терминации на концах немедленных ранних генов, в результате чего экспрессируются отсроченные ранние гены. Белок антитерминации pN специфически действует на ранние единицы транскрипции. Позже во время инфицирования другой антитерминационный белок pQ специфически действует на позднюю единицу транскрипции, позволяя его транскрипции продолжаться после терминальной последовательности.

Различная специфичность pN и pQ устанавливает важный общий принцип: РНК-полимераза взаимодействует с единицами транскрипции таким образом, что вспомогательный фактор может спонсировать антитерминацию специально для некоторых транскриптов. Завершение можно контролировать с той же точностью, что и инициирование.

Антитерминационная активность pN высокоспецифична, но антитерминационное событие не определяется терминаторами t_L1 и т_R1; сайт узнавания, необходимый для антитерминации, находится выше транскрипционной единицы, то есть в другом месте от терминаторного сайта, в котором действие в конечном итоге осуществляется.

Сайты распознавания, необходимые для действия pN, называются орех (для утилизации N). Сайты, ответственные за определение антитерминации влево и вправо, описаны как орех_L и орех_грамм, соответственно.

Когда pN распознает орех сайт, он образует устойчивый комплекс антитерминации во взаимодействии с рядом белков-хозяев E. coli. К ним относятся три белка Nus хозяина: NusA, B и C. NusA - интересный белок. Сам по себе в Кишечная палочка, это часть системы терминации транскрипции. Однако, когда он кооптирован N, он участвует в антитерминации. Комплекс должен действовать на РНК-полимеразу, чтобы фермент больше не реагировал на терминатор. Переменное расположение орех сайты указывают на то, что это событие не связано ни с инициацией, ни с терминацией, но может происходить с РНК-полимеразой, поскольку она удлиняет цепь РНК за сайт ореха. Фаги, относящиеся к лямбда, имеют разные N-гены и разные специфичности антитерминации. Область на геноме фага, в которой орех сайты имеют различную последовательность в каждом из этих фагов, и поэтому каждый фаг должен иметь характерные орех сайты, признанные специально своим собственным pN. Каждый из этих продуктов pN должен обладать одинаковой общей способностью взаимодействовать с аппаратом транскрипции в качестве антитерминационной способности, но каждый продукт также имеет различную специфичность для последовательности ДНК, которая активирует механизм.

Процессивная антитерминация

Антитерминация лямбда индуцируется двумя совершенно разными механизмами. Первый является результатом взаимодействия между белком лямбда N и его мишенями в ранних фаговых транскриптах, а второй - результатом взаимодействия между белком лямбда Q и его мишенью в позднем промоторе фага. Сначала мы опишем механизм N. Лямбда N, небольшой основной белок аргининсемейство РНК-связывающих белков с богатым мотивом (ARM), связывается с 15-нуклеотид (nt) стержень-петля называется BOXB. (Мы будем писать названия сайтов в РНК с заглавной буквы и выделять курсивом названия соответствующих последовательностей ДНК; например, BOXB и boxB.) boxB встречается дважды в лямбда-хромосоме, по одному в каждой из двух ранних опероны. Это близко к начальной точке P_L транскрипт оперона и сразу после первого транслированного гена P_р оперон. Ни расстояние между сайтом начала транскрипции и boxB, ни природа промотора (по крайней мере, в случае сигма-70-зависимых промоторов), ни природа терминатора не имеют отношения к действию N. Хотя boxB последовательность не является хорошо консервативной в других бактериофагах семейства лямбда, большинство этих фагов кодируют белки, которые аналогичны лямбда N и имеют последовательности, способные образовывать BOXB-подобные структуры в их P_L и P_р опероны. В некоторых случаях было показано, что эти структуры распознаются родственными аналогами N. Считается, что это объясняет фаговую специфичность N-опосредованной антитерминации.^[2]

Процессивная антитерминация требует полного антитерминационного комплекса. Сборка NusB, S10 и NusG на коровом комплексе включает от 2 до 7 нуклеотидов лямбда-BOXA (CGCUCUUACACA), а также карбоксиконцевую область N, которая взаимодействует с RNAP. Роль NusG в реакции антитерминации N не ясна. NusG связывается с фактором терминации Rho и с RNAP. Он стимулирует скорость удлинения транскрипции и необходим для активности определенных Rho-зависимых терминаторов. NusG является компонентом полного комплекса антитерминации и усиливает антитерминацию N in vitro. Однако изменение лямбда-BOXA на вариант, называемый консенсусом BOXA (CGCUCUUUAACA), позволяет NusB и S10 собираться в отсутствие NusG. Кроме того, истощение NusG не влияет на антитерминацию лямбда N in vivo, и в отличие от nusA, nusB и nusE не было выделено точечных мутаций в nusG, которые блокируют активность N. Гомолог NusG, RfaH, увеличивает элонгацию нескольких транскриптов в E. coli и S. typhimurium. Возможность того, что RfaH и NusG являются избыточными для антитерминации N, еще не проверена, хотя для некоторых других функций эти два белка не являются взаимозаменяемыми.

Процессивная антитерминация может быть опосредована РНК, а также белками. Колифаг HK022, единственный среди известных лямбдоидных фагов, не кодирует аналог лямбда N. Вместо этого он способствует антитерминации ранней транскрипции фага за счет прямого действия транскрибируемых последовательностей, называемых положить (для использования полимеразы) сайты. Есть два тесно связанных положить сайтов, один из которых расположен в P_L оперон, а другой - в P_р оперон, примерно соответствующий положению орех последовательности в лямбда и других лямбда-родственниках. положить сайты действуют в цис-режиме, способствуя прохождению нижележащих терминаторов в отсутствие всех белков HK022. В положить Предполагается, что транскрипты образуют две петли, разделенные одним неспаренным нуклеотидом. Это предсказание подтверждается мутационными исследованиями и паттерном чувствительности двух РНК к расщеплению одно- и двухцепочечной специфичностью. эндорибонуклеазы. Структура РНК имеет решающее значение для антитерминации, поскольку мутации, предотвращающие образование пар оснований в стеблях, снижают функцию, и эти мутации могут подавляться дополнительными мутациями, восстанавливающими спаривание оснований. Как и лямбда N и Q, ПОЛОЖИТЬ Последовательности подавляют приостановку полимеразы и способствуют процессуальной антитерминации в очищенной системе транскрипции in vitro. В отличие от лямбда N, фаговые или вспомогательные бактериальные факторы не требуются. Единственные известные мутации, блокирующие ПОЛОЖИТЬ-опосредованное антитерминацией изменение высококонсервативных аминокислот, расположенных в богатом цистеином амино-проксимальном домене бета-субъединицы РНКП. Штаммы, несущие эти мутации, не способны поддерживать литический рост HK022, но являются нормальными во всех других протестированных отношениях, включая литический рост лямбда и других родственников лямбда. Ограниченные фагами фенотипы, обусловленные этими мутациями, предполагают, что они изменяют домен RNAP-beta ’, который специфически взаимодействует с возникающими ПОЛОЖИТЬ РНК в комплексе элонгации транскрипции, но эта идея не была напрямую проверена. Стабильность предполагаемого ПОЛОЖИТЬ-RNAP взаимодействие и природа ПОЛОЖИТЬ-индуцированные модификации комплекса удлинения неизвестны.

Процессивная антитерминация была впервые обнаружена у бактериофага, но с тех пор примеры были обнаружены в бактериальных оперонах. Опероны rrn E. coli регулируются механизмом антитерминации, который зависит от сайтов, которые тесно связаны с лямбда. boxA и расположен промотор проксимальнее структурных генов 16S и 23S в каждом опероне. Последовательности сайтов rrn BOXA более похожи на консенсус бактериофага, чем на последовательность лямбда, и они связывают NusB-S10 более эффективно. Хотя структуры стебель-петля, аналогичные BOXB, обнаруживаются в промоторе проксимальнее сайтов BOXA, они не являются существенными для антитерминации. Последовательность rrn BOXA обеспечивает полную антитерминационную активность против Rho-зависимых, но не против внутренних терминаторов. BOXA также увеличивает скорость удлинения транскрипции с помощью RNAP. Точечные мутации в BOXA вызывают преждевременное прекращение транскрипции. Для антитерминации rrn требуется NusB in vivo, как показал эксперимент по истощению NusB. NusA стимулирует скорость удлинения цепей рРНК, несущих BOXA. Роль NusA дополнительно подтверждается наблюдением, что мутация nusA10 (Cs) ингибирует как антитерминацию, так и скорость элонгации транскрипции в опероне rrn. Роль других факторов Nus в регуляции rrn in vivo неясна. In vitro антитерминационный комплекс, который включает NusA, NusB, S10 и NusG, образуется в последовательности BOXA rrnG, но этих компонентов самих по себе недостаточно для антитерминации. Требуется дополнительный фактор или факторы, которые могут быть предоставлены клеточным экстрактом, но их идентичность неизвестна.

Рекомендации

• Кребс, Дж. Э., Гольдштейн, Э. С., Левин, Б., и Килпатрик, С. Т. (2010). Антитерминация может быть регулируемым событием. В основных генах Левина (2-е изд., Стр. 287–291). Садбери, Массачусетс: Jones and Bartlett Publishers
• Вайсберг, Р. А., и Готтесман, М. Е. (1999). Процессивная антитерминация. Журнал бактериологии, 181 (2), 359-367

внешняя ссылка

• Журнал бактериологии Американского общества микробиологии
• Основные гены Левина в Google Книгах