WikiDer > C18-Säule
EIN C18-Spalte ist ein Kieselsäuresäule benutzt in Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (HPLC) und Festphasenextraktion (SPE).
Die Silicaoberflächen in einer C18-Säule sind mit Octadecylgruppen (C18) modifiziert. Dadurch ist die C18-Säule sehr unpolar.
Spalteneigenschaften
Für Umkehrphasensäulen ist der stationäre Phaseunpolar und der Mobile Phase meist Polar- (wässrig). Bei einer C18-Säule ist die Innenseite, die stationäre Phase, aus Octadecylgruppen. Das Polar-Mobile Phase steht oft in einer zusammengesetzten Beziehung zwischen organisches Material und Wasser.
HPLC
Eine C18-Säule ist normalerweise 10-15 cm lang mit einem Innendurchmesser von bis zu 4,6 mm. Die Kieselgelpartikel im stationäre Phase haben eine Oberfläche von ca. 350 m2/g.
SPE
Der Trennmechanismus von SPE basiert auf der Löslichkeit von Analyt, Wechselwirkung mit der Funktionsgruppe von Sorptionsmittel, Beibehaltung von Lösungsmittel und Elution des Analyt. Die treibende Kraft hinter SPE sind Druck, Vakuum und Schwerkraft. Durch den Druck auf das Vakuum, die geschlossene Säule und die Schwerkraft erfolgt die Elution des Analyten schneller.
Trennmethode
Durch hydrophob Wechselwirkungen werden zu Stoffen im Mobile Phase voneinander getrennt. Das log P-Wert eines Stoffes bestimmt, wie gut ein Stoff an stationäre Phase an der Säule befestigt ist und wie schnell sie sich von der Säule löst. Wenn der Stoff ganz ist unpolar es haftet gut an der Säule und es dauert länger, bis sich die Substanz wieder von der Säule löst. Polar- Substanzen haften hart an den unpolarstationäre PhaseWenn sie sich also daran halten, dauert es nicht lange, bis sich der Staub wieder löst. Kurz gesagt, die Retention nimmt mit abnehmender Polarität des zu Analyt.
HPLC vs. SPE
Eine SPE-C18-Säule und eine HPLC-C18-Säule sind nicht gleich, zusätzlich zur gleichen Trennmethode. Es gibt einen großen Unterschied in der Partikelgröße, der Packbetteffizienz, Tellernummern bei der Trennung ähnlicher Verbindungen. Ein Unterschied in Untertassennummer kann viel über die Effizienz einer Säule aussagen. Zum Beispiel hat eine HPLC-Säule eine viel höhere Untertassennummer als eine SPE-Säule kann auch eine HPLC-Säule ähnliche Verbindungen trennen; mit einer SPE-Säule ist dies schwierig.
Methode
SPE
Zunächst muss die Kolonne konditioniert werden, da die Silanol-Schwänze in der Kolonne dicht beieinander liegen. Wenn die Säule mit einem organischen Lösungsmittel konditioniert wird, trennen sich die Schwänze, was zu einer Vergrößerung der Oberfläche führt. Danach wird Wasser durch die Säule eluiert, dadurch wird sichergestellt, dass die Analyt haftet eher an den Silanolschwänzen als im organischen Lösungsmittel. Beim Auftragen der Probe haften unpolare Substanzen an der Säule. Eluiert man dann mit einer Lösung einer organischen Flüssigkeit in einem bestimmten Verhältnis mit Polar- flüssig, die Analyt von der Säule wegbewegen.
Möglicherweise ist die Säule gesättigt. Um zu überprüfen, ob die Säule gesättigt ist, kann die Probe nach dem Auftragen erneut mit Wasser eluiert werden, danach wird sie gesammelt und kann per DC überprüft werden.
HPLC
Wenn eine Substanz nachgewiesen werden muss, muss das HPLC-System unter guten Bedingungen messen. Hier sind die Fließrate, sind Druck und Konzentration der nachgewiesenen Substanz optimal. Also Mehrfachmessungen mit unterschiedlichen Fließrate, Druck und Konzentration der nachgewiesenen Substanz sind wichtig. Danach können die notwendigen Messungen bei optimalen Werten für diese Parameter durchgeführt werden.
Man kann nie mehr spritzen als im Zuge des 6-Port-Injektors, alles was zu viel ist, geht auf den Müll.
Quellen
- Chemische Analyse – Moderne Geräte und Techniken, von Rouessac & Rouessac