WikiDer > DNA-Ligase
DNA-Ligase ist ein besonderer Typ Ligase (EG-Nummer 6.5.1.X) dass DNAStränge, von denen beide komplementär Stränge sind gebrochen, können es wieder zusammenbringen. Die benötigte Energie wird gewonnen aus ATP.
Ein Einzelstrangbruch kann leicht passieren easily DNA-Polymerase kann repariert werden, indem der komplementäre Strang als Base verwendet wird, aber ein Doppelbruch kann dieses Enzym nicht reparieren.
DNA-Ligase ist an DNA-Reparaturmechanismen sowie an DNA beteiligtReproduzieren.
DNA-Ligasen werden häufig in der Molekularbiologie vor dem RekombinationExperimente.
Ligase-Mechanismus
Der Mechanismus der DNA-Ligase beruht darauf, dass sie an den Bruchstellen a enthält kovalentPhosphodiesterbindung zwischen dem 3'-Hydroxyl-Ende von einem Nukleotid mit dem 5'-Phosphat-Ende des anderen Nukleotids.
Ein Beispiel dafür, wie die klebrige Ligase bei einer Schrägfraktur funktioniert, ist:
5'-AGTCTGATCTGACTGATGCGTATGCTAGTGCT-3'3'-TCAGACTAGACTGACTACGCATACGATCACGA-5'
gibt
5'-AGTCTGATCTGACTGATGCGTATGCTAGTGCT-3'3'-TCAGACTAGACTGACTACGCATACGATCACGA-5'
Ligase arbeitet auch mit einem geraden Bruch, jedoch ist eine höhere Konzentration des Enzyms und andere Reaktionsbedingungen erforderlich.
Ligasen bei Säugetieren
Bei Säugetieren gibt es vier spezifische Arten von Ligasen.
- DNA-Ligase I: Stäbchen Okazaki-Fragmente die bei der DNA-Replikation zusammen gebildet werden und auch einige rekombinant-Stücke.
- DNA-Ligase II: eine alternative Form der DNA-Ligase III, die in sich nicht teilenden Zellen vorkommt.
- DNA-Ligase III: an der DNA-Reparatur beteiligt. Die DNA-Ligase III bildet eine Komplexverbindung mit dem ProteinXRCC1, das hilft, eine Base zu entfernen, at Mutationen und in rekombinanten Stücken.
- DNA-Ligase IV: geht eine komplexe Bindung mit dem DNA-Protein ein XRCC4 und hat die gleiche Aktivität wie DNA-Ligase III. Es ist wichtig für die Entwicklung eines Organismus.
Molekularbiologie
Im Labor werden aus Organismen oder durch Rekombination gewonnene Ligasen verwendet, um DNA-Stücke wieder zu verbinden. Die mit Restriktionsendonukleasen aus Organismus(en) geschnittenen DNA-Stücke werden mit Ligase in einer ATP-enthaltenden Pufferlösung wieder verbunden. Es wird ein neues geben Plasmid habe das über gemacht Transformation in ein Bakterium eingebracht werden kann.
Ligen im Handel
Die kommerziell erhältlichen DNA-Ligasen wurden in den Phagen T4 von Escherichia coli und andere Bakterien.