WikiDer > Стрептамер

Эта статья содержит контент, который написан как Реклама. Пожалуйста помоги Улучши это путем удаления рекламный контент и неуместно внешняя ссылка, а также путем добавления энциклопедического содержания, написанного с нейтральная точка зрения. (Май 2019) (Узнайте, как и когда удалить этот шаблон сообщения)

В Стрептамер технология позволяет обратимое выделение и окрашивание антигенспецифических Т-клетки. Эта технология сочетает в себе текущий метод выделения Т-клеток с Стреп-тег технологии. В принципе, Т-клетки разделяются путем установления специфического взаимодействия между интересующей Т-клеткой и молекулой, конъюгированной с маркером, что делает возможным выделение. Обратимость этого взаимодействия и тот факт, что оно проводится при низких температурах, является причиной успешного выделения и характеристики функциональных Т-клеток. Поскольку Т-клетки остаются фенотипически и функционально неотличимыми от необработанных клеток, этот метод предлагает новые стратегии в клинической и базовой Исследование Т-клеток.^[1]

Классические методы исследования Т-клеток

Т-клетки играют важную роль в адаптивном иммунная система. Они способны управлять, регулировать и координировать сложные иммунные реакции. С функцией или нарушением функции Т-клеток связан широкий спектр клинически значимых аспектов: Аутоиммунные заболевания, контроль над популярный или же бактериальный патогены, развитие рак или же прививать по сравнению с ответами хозяина. В последние годы различные методы (Анализ ELISpot, окрашивание внутриклеточных цитокинов, анализ секреции) были разработаны для идентификации Т-клеток, но только главный комплекс гистосовместимости (MHC) процедуры позволяют идентифицировать и очищать антиген-специфические Т-клетки независимо от их функционального статуса.

В принципе, процедуры MHC используют Рецептор Т-клеток (TCR) лиганд, который представляет собой комплекс MHC-пептид, в качестве окрашивающего зонда. MHC взаимодействует с TCR, который, в свою очередь, экспрессируется на Т-клетках. Поскольку взаимодействия TCR-MHC имеют только очень слабую близость по отношению друг к другу мономерные комплексы MHC-эпитоп не могут обеспечить стабильного связывания. Эту проблему можно решить, используя мультимеризованные MHC-эпитопы, которые увеличивают связывание жадность и, следовательно, обеспечивает стабильное связывание. Флуорохромы конъюгированные с MHC-мультимерами, затем могут быть использованы для идентификации Т-клеток с помощью проточной цитометрииВ настоящее время молекулы MHC могут быть получены рекомбинантно вместе с антигенными пептидами, которые известны быстрорастущим числом заболеваний.

Технология Streptamer

Основа Streptamer

Принцип окрашивания стрептамеров сочетает в себе классический метод выделения Т-клеток с помощью MHC-мультимеров с Стреп-тег/Стреп-Тактин технологии. В Strep-tag представляет собой короткую пептидную последовательность, которая демонстрирует умеренное связывание близость для биотинсайт связывания мутированной молекулы стрептавидина, называемый Strep-Tactin. Для технологии Streptamer молекулы Strep-Tactin мультимеризованы и образуют «каркас», тем самым создавая платформу для связывания с белками, меченными стрептококками. Кроме того, основа Strep-Tactin имеет флуоресцентную метку, позволяющую проводить анализ проточной цитометрии. Инкубация слитых белков MHC-Strep-tag с остовом Strep-Tactin приводит к образованию MHC-мультимера, который способен к антиген-специфическому окрашиванию Т-клеток.

Обратимое окрашивание

Поскольку молекула d-биотина имеет гораздо более высокое сродство к Strep-Tactin, чем Strep-tag, она может эффективно конкурировать за сайт связывания.^[2][3] Следовательно, мультимер MHC, основанный на взаимодействии Strep-tag со Strep-Tactin, легко разрушается в присутствии относительно низких концентраций d-биотина. Без остова Strep-Tactin отдельные слитые белки MHC-Strep-tag спонтанно отделяются от TCR Т-клетки из-за слабой аффинности связывания (мономерные комплексы MHC-эпитоп не могут обеспечить стабильного связывания, см. Выше).

Рекомендации