WikiDer > HaeIII

HaeIII
Фермент рестрикции типа 2 HaeIII
HaeIII-метилтрансфераза-dna-pdb-1DCT.png
Кристаллическая структура фермента HaeIII свернуто в комплекс с ДНК: внеспиральный цитозин и измененное спаривание оснований.
Идентификаторы
ОрганизмHaemophilus aegyptius
СимволhaeIIIR
RefSeq (Prot)WP_006996034.1
UniProtO68584
Прочие данные
Номер ЕС3.1.21.4
ХромосомаГеномный: 0,7 - 0,7 МБ
HaeIIIR
Идентификаторы
СимволRE_HaeIII
PfamPF09556
ИнтерПроIPR019059

HaeIII один из многих рестрикционные ферменты (эндонуклеазы) тип прокариотической ДНК, которая защищает организмы от неизвестной чужеродной ДНК.[1] Это рестрикционный фермент, используемый в лабораториях молекулярной биологии. Это была третья эндонуклеаза, выделенная из Haemophilus aegyptius бактерии. Сайт узнавания фермента - место, где он разрезает ДНК молекулы - это GGCC нуклеотид последовательность, которая означает, что она расщепляет ДНК по сайту 5'-GG / CC-3. Сайт распознавания обычно составляет около 4-8 бит / с.[1].Этот фермент ген был секвенирован и клонирован. Это сделано для того, чтобы фрагменты ДНК оказались тупыми. HaeIII не эффективен для расщепления одноцепочечной ДНК.

Характеристики

HaeIII имеет молекулярную массу 37126. После того, как имеет место 2-10-кратное увеличение Hae III, происходит переваривание субстрата ДНК. Это приводит к 100% разрезанию, лигированию более 50% фрагментов и повторному разрезанию более 95%. Тепловая инактивация происходит при температуре около 80 ° C в течение 20 минут. Локус фермента HaeIII находится на AF05137 и является линейным с 957 парами оснований.

История

HaeIII вместе с другими рестрикционными ферментами были открыты в 1970 году Вернером Арбером и Мэтью Мезельсоном. В ХэIII метилтрансфераза, также известная как ген МТазы из Haemophilus aegyptius (последовательность узнавания: 5'-GGCC-3 ') превращали в Кишечная палочка (кишечная палочка) в плазмидном векторе pBR322. Ген был извлечен из одного ЭкоФрагмент РИ и одиночный ЗадняяIII фрагмент фермента. Было обнаружено, что клоны, несущие дополнительные соседние фрагменты, кодируют ХэIII рестрикционный фермент.

Функция

Фермент расщепляет ДНК в положениях, где находится последовательность GGCC. Расщепление происходит между вторым и третьим нуклеотидами (грамм и C). Полученные фрагменты ДНК известны как рестрикционные фрагменты. HaeIII разрезает обе цепи ДНК в одном и том же месте, давая рестрикционные фрагменты с тупые концы. Тепловая денатурация происходит при 80 ° C через 20 минут.[2]

Метилаза

Haemophilus aegyptius также несет метилазу, названную HaeIIIM (P20589), который метилирует внутренние цитозины в последовательности GGCC. Он защищает последовательности от разрезания HaeIII и образует система модификации ограничений. Фермент HaeIII происходит из Кишечная палочка штамм, несущий клонированный ген модификации HaeIII из Haemophilus aegyptius.

Рекомендации

  1. ^ а б «ИнтерПро». www.ebi.ac.uk. Получено 2020-04-06.
  2. ^ «Фермент рестрикции HaeIII». theLabRat.com. 2005.

дальнейшее чтение

  • Rawn JD (1989). Биохимия (Международное изд.). ISBN 0-89278-405-9.
  • Слатко Б.Е., Крофт Р., Моран Л.С., Уилсон Г.Г. (декабрь 1988 г.). «Клонирование и анализ генов метилтрансфераз HaeIII и HaeII». Ген. 74 (1): 45–50. Дои:10.1016 / 0378-1119 (88) 90248-х. PMID 3248732.
  • Блейксли Р. В., Доджсон Дж. Б., Нес И. Ф., Уэллс Р. Д. (октябрь 1977 г.). «Дуплексные области в« одноцепочечной »ДНК phiX174 расщепляются эндонуклеазой рестрикции из Haemophilus aegyptius». Журнал биологической химии. 252 (20): 7300–6. PMID 71298.
  • Хоффман Дж. Л. (июль 1986 г.). «Хроматографический анализ хиральной и ковалентной нестабильности S-аденозил-L-метионина». Биохимия. 25 (15): 4444–9. Дои:10.1021 / bi00363a041. PMID 3530324.