WikiDer > Протонный канал M2

M2 proton channel
3D модель вириона гриппа. (M2 отмечен белым.)

В Матрикс-2 (М2) белок это протон-селективный виропорин, интеграл в вирусный конверт из грипп Вирус. Сам канал представляет собой гомотетрамер (состоит из четырех одинаковых блоков M2), где блоки представляют собой спирали, стабилизированные двумя дисульфидные связи, и активируется низким pH. Белок M2 кодируется на седьмом сегменте РНК вместе с Белок M1. Протонная проводимость белка M2 при гриппе А важна для репликации вируса.

Грипп Вирусы B и C кодируют белки со сходной функцией, получившие название «BM2» и «CM2» соответственно. У них мало общего с M2 на уровне последовательностей, несмотря на схожую общую структуру и механизм.[1]

Структура

Flu_M2
PDB 1nyj EBI.jpg
структура замкнутого состояния h + канала белка m2 по данным твердотельной ЯМР-спектроскопии
Идентификаторы
СимволFlu_M2
PfamPF00599
ИнтерПроIPR002089
SCOP21mp6 / Объем / СУПФАМ
TCDB1.A.19
OPM суперсемейство185
Белок OPM2квт

В вирусе гриппа A белковая единица M2 состоит из трех белковых сегментов, содержащих 97 аминокислотных остатков: (i) внеклеточный N-концевой домен (остатки 1–23); (ii) а трансмембранный сегмент (ТМС) (остатки 24–46); (iii) внутриклеточный С-концевой домен (остатки 47–97). ТМС формирует поры ионного канала. Важными остатками являются имидазол His37 (датчик pH) и индол Trp41 (гейт).[2] Этот домен является мишенью противогриппозных препаратов, амантадин и его этиловое производное римантадин, а также, вероятно, метильное производное римантадина, адапромин. Первые 17 остатков цитоплазматического хвоста М2 образуют высококонсервативный амфипатический спираль.[3]

Остатки амфипатической спирали (46–62) в цитоплазматическом хвосте играют роль в почкование и сборка вируса. Вирус гриппа использует эти амфипатические спирали в M2 для изменения кривизны мембраны на шейке почки вируса холестерин-зависимым образом.[4] Остатки 70–77 цитоплазматического хвоста важны для связывания с M1 и для эффективного производства инфекционных вирусных частиц. Этот регион также содержит кавеолин связывающий домен (CBD). С-концевой конец канала простирается в петлю (остатки 47-50), которая соединяет трансмембранный домен с С-концом. амфипатический спираль. (46–62). Сообщалось о двух различных структурах усеченных форм M2 с высоким разрешением: кристаллическая структура мутированной формы трансмембранного участка M2 (остатки 22–46),[5] а также более длинная версия белка (остатки 18-60), содержащая трансмембранную область и сегмент C-концевого домена, как было исследовано ядерный магнитный резонанс (ЯМР).[6]

Эти две структуры также предполагают разные сайты связывания для класса адамантана противогриппозных препаратов. Согласно кристаллической структуре с низким pH, одиночная молекула амантадина связывается в середине поры, окруженная остатками Val27, Ala30, Ser31 и Gly34. Напротив, структура ЯМР показала, что четыре молекулы римантадина связываются с липидом, обращенным к внешней поверхности поры, взаимодействуя с остатками Asp44 и Arg45. Однако недавняя структура твердотельной ЯМР-спектроскопии показывает, что канал M2 имеет два сайта связывания для амантадина, один сайт с высоким сродством находится в N-концевом просвете, а второй сайт с низким сродством на C-концевой поверхности белка.[7]

Протонная проводимость и селективность

Ионный канал M2 обоих вирусов гриппа A очень селективен для протонов. Канал активируется низким pH и имеет низкую проводимость.[8] Остатки гистидина в положении 37 (His37) ответственны за эту протонную селективность и модуляцию pH. Когда His37 заменяется глицином, аланином, глутаминовой кислотой, серином или треонином, протон-селективная активность теряется, и мутант может транспортировать Na+ и K+ ионы тоже. Когда имидазольный буфер добавляется к клеткам, экспрессирующим мутантные белки, ионная селективность частично восстанавливается.[9]

Acharya et al. предположили, что механизм проводимости включает обмен протонами между His37 имидазольными фрагментами M2 и водами, ограниченными внутренней частью пучка M2.[10] Молекулы воды внутри поры образуют сети с водородными связями или «водные провода» от входа в канал до His37. Карбонильные группы, выстилающие поры, хорошо расположены для стабилизации ионов гидроксония за счет взаимодействий второй оболочки с участием мостиковых молекул воды. Коллективный переключатель ориентации водородных связей может способствовать направленности потока протонов, поскольку His37 динамически протонируется и депротонируется в цикле проводимости.[11] Остатки His37 образуют коробчатую структуру, ограниченную с обеих сторон кластерами воды с хорошо упорядоченными атомами кислорода рядом. Конформация белка, который является промежуточным между структурами, ранее решенными при более высоком и более низком pH, предполагает механизм, с помощью которого конформационные изменения могут способствовать асимметричной диффузии через канал в присутствии протонного градиента. Более того, протоны, диффундирующие через канал, не обязательно должны быть локализованы в одном имидазоле His37, но вместо этого могут быть делокализованы по всему His-боксу и связанным с ним кластерам воды.

Функция

Белок канала M2 является важным компонентом вирусной оболочки из-за его способности образовывать высокоселективный, регулируемый pH, проводящий протон канал. Протонный канал M2 поддерживает pH в вирусной оболочке во время запись в ячейку и через транс-Гольджи мембрана инфицированных клеток во время вирусного созревания. Когда вирус попадает в клетку-хозяин рецептор-опосредованного эндоцитоза, эндосомный происходит подкисление. Этот низкий pH активирует канал M2, который переносит протоны в ядро ​​вириона. Подкисление внутренностей вируса приводит к ослаблению электростатическое взаимодействие и приводит к диссоциации между M1 и вирусными рибонуклеопротеидными (RNP) комплексами. Последующее слияние мембран высвобождает непокрытые РНП в цитоплазму, которые импортируются в ядро, чтобы начать репликацию вируса.

После синтеза в инфицированной клетке-хозяине M2 вставляется в эндоплазматический ретикулум (ER) и транспортируется на поверхность клетки через сеть транс-Гольджи (TGN). В кислых TGN M2 переносит H+ ионы из просвета, и поддерживает гемагглютинин (HA) метастабильная конфигурация.[12] Было показано, что при его локализации TGN активность ионного канала белка M2 эффективно активирует NLRP3 воспаление путь.[13]

Другими важными функциями M2 являются его роль в образовании нитчатых штаммов гриппа, разрыве мембраны и высвобождении почкующегося вириона. M2 стабилизирует сайт почкования вируса, и мутации M2, которые препятствуют его связыванию с M1, могут нарушать образование филаментов в месте почкования.

Транспортная реакция

Обобщенная транспортная реакция, катализируемая каналом M2, имеет вид:

ЧАС+ (уходит) ⇌ H+ (в)

Торможение и сопротивление

Препарат против вируса гриппа, амантадин, является специфическим блокатором M2 H+ канал. В присутствии амантадина вирусное разрушение оболочки является неполным, и ядро ​​RNP не способствует развитию инфекции. Аминоадамантаны, включая амантадин и римантадин от них широко отказались из-за устойчивости к вирусам, но термодинамические соображения позволяют создавать новые производные.[14]

Было предложено два разных сайта для взаимодействия лекарств. Один из них представляет собой обращенный к липиду карман между 2 соседними трансмембранными спиралями (вокруг Asp-44), в котором лекарство связывается и аллостерически ингибирует протонную проводимость. Другой находится внутри поры (вокруг Ser-31), в которой лекарство напрямую блокирует прохождение протонов.[15]

Однако M2 ген восприимчив к мутации. Когда один из пяти аминокислоты в трансмембранной области заменяется подходящим образом, вирус становится устойчивым к существующим ингибиторам M2. Мутация S31N отвечает за более чем 90% устойчивость к препаратам амантадин и римантадин. Поскольку мутации относительно часты, наличие факторов отбора (например, использование амантадина для лечения больных домашних птиц) может привести к появлению устойчивого штамма. CDC США опубликовал информацию о том, что большинство штаммов теперь устойчивы к двум доступным лекарствам, и их использование следует прекратить.

Белки гриппа B и C M2

Протонный канал M2
Идентификаторы
СимволFlu_B_M2
PfamPF04772
ИнтерПроIPR006859
CM2
Идентификаторы
СимволCM2
PfamPF03021
ИнтерПроIPR004267

Грипп Вирусы B и C кодируют вирионные белки со сходной функцией передачи протонов, получившие название «BM2» и «CM2» соответственно. У них мало общего с M2 на уровне последовательностей, несмотря на схожую общую структуру и механизм.[1][16]

BM2

Белок M2 вируса гриппа B имеет длину 109 остатков, гомотетрамер и является функциональным гомологом белка гриппа А. Практически отсутствует гомология последовательностей между AM2 и BM2 вируса гриппа, за исключением мотива последовательности HXXXW в TMS, который важен для функции каналов. Его профиль pH по протонной проводимости аналогичен профилю AM2. Однако активность канала BM2 выше, чем у AM2, а активность BM2 совершенно нечувствительна к амантадину и римантадину.[1] Структура канала гриппа В при разрешении 1,4–1,5 Å, опубликованная в 2020 году, показала, что механизм открытия канала отличается от механизма открытия канала гриппа А.[17]

CM2

CM2 может играть роль в упаковке генома вирионов.[18] CM2 регулирует внутриклеточный pH и в этом качестве способен заменить грипп A M2.[19]

Смотрите также

Рекомендации

  1. ^ а б c Pielak RM, Chou JJ (февраль 2011 г.). «Протонные каналы гриппа М2». Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Биомембраны. 1808 (2): 522–9. Дои:10.1016 / j.bbamem.2010.04.015. ЧВК 3108042. PMID 20451491.
  2. ^ Тан Й., Зайцева Ф, Лэмб Р.А., Пинто Л.Х. (октябрь 2002 г.). «Ворота протонного канала M2 вируса гриппа образованы одним остатком триптофана». Журнал биологической химии. 277 (42): 39880–6. Дои:10.1074 / jbc.M206582200. PMID 12183461.
  3. ^ Holsinger LJ, Nichani D, Pinto LH, Lamb RA (март 1994). "Белок ионного канала M2 вируса гриппа A: структурно-функциональный анализ". Журнал вирусологии. 68 (3): 1551–63. Дои:10.1128 / JVI.68.3.1551-1563.1994. ЧВК 236612. PMID 7508997.
  4. ^ Россман Дж. С., Джинг Х, Лезер Г. П., Лэмб Р. А. (сентябрь 2010 г.). «Белок М2 вируса гриппа опосредует ESCRT-независимое расслоение мембраны». Клетка. 142 (6): 902–13. Дои:10.1016 / j.cell.2010.08.029. ЧВК 3059587. PMID 20850012.
  5. ^ Стоуфер А.Л., Ачарья Р., Салом Д., Левин А.С., Ди Костанцо Л., Сото С.С., Терешко В., Нанда В., Стейрук С., ДеГрадо В.Ф. (январь 2008 г.). «Структурные основы функции и ингибирования протонного канала вируса гриппа». Природа. 451 (7178): 596–9. Bibcode:2008Натура.451..596S. Дои:10.1038 / природа06528. ЧВК 3889492. PMID 18235504.
  6. ^ Schnell JR, Chou JJ (январь 2008 г.). «Структура и механизм протонного канала М2 вируса гриппа А». Природа. 451 (7178): 591–5. Bibcode:2008Натура.451..591S. Дои:10.1038 / природа06531. ЧВК 3108054. PMID 18235503.
  7. ^ Cady SD, Schmidt-Rohr K, Wang J, Soto CS, Degrado WF, Hong M (февраль 2010 г.). «Структура сайта связывания амантадина протонных каналов М2 гриппа в липидных бислоях». Природа. 463 (7281): 689–92. Bibcode:2010Натура.463..689C. Дои:10.1038 / природа08722. ЧВК 2818718. PMID 20130653.
  8. ^ Mold JA, Li HC, Dudlak CS, Lear JD, Pekosz A, Lamb RA, Pinto LH (март 2000 г.). «Механизм протонной проводимости ионного канала M (2) вируса гриппа А». Журнал биологической химии. 275 (12): 8592–9. Дои:10.1074 / jbc.275.12.8592. PMID 10722698.
  9. ^ Венкатараман П., Лэмб Р.А., Пинто Л.Х. (июнь 2005 г.). «Химическое спасение мутантов фильтра гистидиновой селективности ионного канала M2 вируса гриппа A». Журнал биологической химии. 280 (22): 21463–72. Дои:10.1074 / jbc.M412406200. PMID 15784624.
  10. ^ Ачарья Р., Карневале В., Фиорин Г., Левин Б.Г., Полищук А.Л., Баланник В., Самиш И., Лэмб Р.А., Пинто Л.Х., ДеГрадо В.Ф., Кляйн М.Л. (август 2010 г.). «Структура и механизм транспорта протонов через трансмембранный тетрамерный белковый пучок М2 вируса гриппа А». Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки. 107 (34): 15075–80. Bibcode:2010PNAS..10715075A. Дои:10.1073 / pnas.1007071107. ЧВК 2930543. PMID 20689043.
  11. ^ Томастон Дж. Л., Альфонсо-Прието М., Уолдейес Р. А., Фрейзер Дж. С., Кляйн М. Л., Фиорин Г., ДеГрадо В. Ф. (ноябрь 2015 г.). «Структуры с высоким разрешением канала M2 вируса гриппа A обнаруживают динамические пути стабилизации и трансдукции протонов». Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки. 112 (46): 14260–5. Bibcode:2015ПНАС..11214260Т. Дои:10.1073 / pnas.1518493112. ЧВК 4655559. PMID 26578770.
  12. ^ Сакагути Т., Лесер Г.П., Лэмб Р.А. (май 1996 г.). «Активность ионного канала белка M2 вируса гриппа влияет на транспорт через аппарат Гольджи». Журнал клеточной биологии. 133 (4): 733–47. Дои:10.1083 / jcb.133.4.733. ЧВК 2120830. PMID 8666660.
  13. ^ Ичинохе Т., Панг И.К., Ивасаки А. (май 2010 г.). «Вирус гриппа активирует инфламмасомы через свой внутриклеточный ионный канал M2». Иммунология природы. 11 (5): 404–10. Дои:10.1038 / ni.1861. ЧВК 2857582. PMID 20383149.
  14. ^ Хомейер Н., Иоаннидис Х., Коларов Ф., Гауглиц Г., Зикос С., Колокурис А., Гольке Х. (январь 2016 г.). «Интерпретация термодинамических профилей аминоадамантановых соединений, ингибирующих протонный канал M2 гриппа А, с помощью расчетов свободной энергии». Журнал химической информации и моделирования. 56 (1): 110–26. Дои:10.1021 / acs.jcim.5b00467. PMID 26690735.
  15. ^ Pielak RM, Schnell JR, Chou JJ (май 2009 г.). «Механизм лекарственного ингибирования и лекарственной устойчивости канала M2 гриппа A». Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки. 106 (18): 7379–84. Bibcode:2009ПНАС..106.7379П. Дои:10.1073 / pnas.0902548106. ЧВК 2678642. PMID 19383794.
  16. ^ Кукол А, Аркин И.Т. (февраль 2000 г.). «Структура трансмембранного домена белка CM2 вируса гриппа С, полученная с помощью сайт-специфического инфракрасного дихроизма и глобального молекулярно-динамического поиска». Журнал биологической химии. 275 (6): 4225–9. Дои:10.1074 / jbc.275.6.4225. PMID 10660588.
  17. ^ Венката С. Мандала, Александр Р. Лофтис, Александр А. Щербаков, Брэдли Л. Пентелут, Мей Хонг (2020). «Атомные структуры закрытого и открытого протонного канала гриппа B M2 раскрывают механизм проводимости». Структурная и молекулярная биология природы. 27 (2): 160–67. Дои:10.1038 / с41594-019-0371-2. PMID 32015551. S2CID 211017938.CS1 maint: использует параметр авторов (связь)
  18. ^ Фурукава Т., Мураки Ю., Нода Т., Такашита Е., Шо Р., Сугавара К., Мацудзаки Ю., Шимотай Ю., Хонго С. (февраль 2011 г.). «Роль белка CM2 в цикле репликации вируса гриппа С». Журнал вирусологии. 85 (3): 1322–9. Дои:10.1128 / JVI.01367-10. ЧВК 3020500. PMID 21106743.
  19. ^ Стюарт С.М., Пекош А. (январь 2012 г.). «Белок CM2 вируса гриппа C может изменять внутриклеточный pH, а его трансмембранный домен может заменять домен белка M2 вируса гриппа A и поддерживать производство инфекционного вируса». Журнал вирусологии. 86 (2): 1277–81. Дои:10.1128 / JVI.05681-11. ЧВК 3255851. PMID 21917958.

внешняя ссылка